科研产出
玉米黄烷酮-3-羟化酶原核表达条件对香橙素生成量的影响
《食品与发酵工业 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：香橙素是类黄酮代谢途径中重要的中间化合物,黄烷酮-3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase,F3H)能以柚皮素为底物催化C3位接羟基从而生成香橙素.为实现香橙素绿色发展,该研究利用微生物法,对来自玉米的Zmf3h构建大肠杆菌原核表达系统后诱导ZmF3H蛋白表达.通过发酵实验验证ZmF3H在胞内可溶性表达并成功催化生成香橙素.为提高香橙素产量,对蛋白表达阶段的菌体密度、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导剂浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行优化实验.单因素试验结果表明各实验组分别在菌种密度OD600=0.8~1.0,IPTG终浓度为0.6 mmol/L,诱导温度在23℃,诱导8 h时可明显提高香橙素生成量,综合各单因素优化条件进行实验验证后发现香橙素生成量为(32.27±1.98)mg/L,与初始条件相比提高了60.39%.
关键词： 香橙素;黄烷酮-3-羟化酶;原核表达;表达条件优化
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大肠杆菌表达类黄酮O-甲基转移酶合成槲皮素甲基化衍生物
《食品与生物技术学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：苷皮素是一种重要的柑橘类黄酮,具有抗菌、抗炎和抗氧化等生物学活性,但水溶性和脂溶性较差,研究表明可通过甲基化提高其代谢稳定性和生物利用度,目前微生物转化法是获得甲基化槲皮素的良好方法.作者筛选了 11种不同来源的类黄酮0-甲基转移酶(FOMT),并根据甲基化位点进行分类构建相应的大肠杆菌工程菌,以槲皮素为底物进行发酵分别合成了 4种单0-甲基槲皮素(柽柳黄素、鼠李素、异鼠李素和3-0-甲基槲皮素),最高产量分别为31.17、11.17、8.90、52.95 mg/L.随后构建了大肠杆菌共培养体系,分步添加含有MpOMT4和OsNOMT的重组大肠杆菌全细胞催化剂,并通过调整体系中两种菌体的比例和生物量,最终确定菌体细胞质量浓度为24 g/L(以细胞干质量计)、两种菌体质量比为1:2时,4',7-二甲氧基槲皮素的最高产量为21.56 mg/L.
关键词： 槲皮素 类黄酮0-甲基转移酶(FOMT) 槲皮素甲基化衍生物 生物合成
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